A traditional medicine, respiratory detox shot (RDS), inhibits the infection of SARS-CoV, SARS-CoV-2, and the influenza A virus in vitro
Brian Hetrick1, Dongyang Yu2, Adeyemi A. Olanrewaju1, Linda D. Chilin1, Sijia He1, Deemah Dabbagh1,Ghaliah Alluhaibi1, Yuan - Chun Ma3, Lewis A. Hofmann4, Ramin M. Hakami1 and Yuntao Wu1*
▋摘要
剧中：现有于是以侵袭亚太东部的新型冠状HIV病 (SARS-CoV-2) 已在 220 多个各东部和东部大流行，截至 2021 年 4 月末已导致激过 1.28 亿人致病，激过 280 500人幸存者。意味著，尚待可必要增大 COVID-19 无故率的用药法则。我们数据数据分析了一种习惯的之前医吗啡剂型——融肺毒吗啡液 (RDS) 的潜在防冠状HIV来时性，该吗啡液主要分离物为东方医学习惯之前用做用药胸腔哮喘的肉桂。
结果：RDS 抑止 SARS-CoV 更慢HIV、SARS-CoV-2 更慢HIV、分离乙型HIV-SARS-CoV-2(Ha-CoV-2) 有假型HIV以及传染性 SARS-CoV-2 和衍生的 Ha-CoV-2 种属HIV (B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.429、B.1.2、B.1.494、B.1.1.207、B.1.258 和 B.1.1.298) 对细胞内核的致病。我们促使断言了 RDS 可以同样灭来时 SARS-CoV-2 HIV粒状的传染性。此外，我们推断出 RDS 还可堵托乙型亚型对细胞内核的致病。
得出结论：RDS 可最常抑止肠胃HIV致病。链接：SARS-CoV-2，COVID-19，冠状HIV，防HIV用药，融肺毒吗啡液，习惯之前医，SARS-CoV，乙型猪流感，Ha-CoV-2，SARS-CoV-2 有假型HIV
▋剧中
现有于是以侵袭亚太东部的新型冠状HIV病 (SARS-CoV-2) 已在 220 多个各东部和东部大流行，截至 2021 年 4 月末已导致激过 1.28 亿人致病，激过 280 500人幸存者。意味著，尚待可必要增大 COVID-19 无故率的用药法则。新显现的 COVID-19 HIV病原体为冠状HIV SARS-CoV-2[1]，是 SARS-CoV 在轻微急性呼吸囊肿就其冠状HIV品种之前的表兄弟HIV[2,3]。SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 最初都是在之前国推断出的；SARS-CoV HIV于 2002 年 11 月末在广东省首次被推断出[4-6]，SARS-CoV-2 则于 2019 年 12 月末在武汉首次被推断出[1,7,8]。在之前国，这两次由冠状HIV引来的霍乱之前，之前医大多被最常用到，用意紧急促使冠状HIV引来的哮喘。对于意味著的 COVID-19 大流行，之前国有激过 85% 的 SARS-CoV-2 致病患者给予了习惯之前医药药物（9，10）。许多用到的之前医应该具备必要的防冠状HIV特性并在流行病学上应该必要，这个重要问题尚未给予前提回信。
之前医作为用药冠状HIV所掀起哮喘的必要药物，但由于缺乏肾脏或肾脏的系统数据数据分析，其发展与前提用到大多受到了阻碍。为了已确定之前医的潜在防 SARS-CoV-2 来时性，我们从常用之前医之前检验了多种肉桂精油，并从之前医吗啡液 RDS(澳大利亚一种商业性性药品阿斯巴甜) 之前推断出了防 SARS-CoV 和防 SARS-CoV-2 HIV的来时性，一种在澳大利亚的商业性药品阿斯巴甜。RDS 用做进一步提高人体性疾病的相比较健康，其还包括有多种肉桂分离物，如大蒜和益母草，它们是习惯上用做操纵病变和胸腔哮喘的肉桂 (11-13)。在此，我们报导 RDS 对 SARS-CoV、SARS-CoV-2 有假HIV以及具备致病性的野生型 SARS-CoV-2 HIV对细胞内核的致病具备抑止作用。我们促使断言 RDS 可通过同样灭来时HIV粒状或阻止HIV侵占而抑止HIV的以前致病时程。此外，我们推断出 RDS 还可以阻止甲流HIV对细胞内核的致病。这些结果表明，RDS 对肠胃HIV的致病或许具备最常的抑止作用。
▋结果
为了从习惯肉桂之前看到潜在的防 SARS-CoV-2 来时性，我们从约四十种习惯肉桂之前检验提炼出出 SARS-CoV-2S 亚基有假型更慢HIV[14,15] 和人体胸腔 A549(ACE2) 细胞内核，此人类 ACE2 基因会通过更慢HIV转导作为核酸介导，从而保持稳定转导来借助激强调。更慢有假型HIV用到绿色发光亚基 (GFP) 或发光以次酶 (Luc) 作为报导基因，并通过了具备广谱防HIV转入抑止剂，以及贝拉巴格 (Arbidol)[16]，和人类防毒血清对防 SARS-CoV-2(所示 1a、C) 的于是以确性。我们能够成功扫描到贝拉巴格 (Arbidol) 和防毒血清对于 SARS-CoV-2 有假型HIV的抑止作用，这是我们在其他四十余种习惯肉桂精油飞行测试之前无法推断出的，有数其之前一些依赖于较高刺激性的肉桂 (所示 1a-C)。然而，鉴于更慢性有假型HIV仅有能扫描 SARS-CoV-2 HIV的侵占不道德，我们不能除去这些肉桂精油或许有在转入后期中能够抑止 SARS-CoV-2 的或许性。我们促使从习惯类固醇融肺毒吗啡液 (RDS) 之前检验出了或许的防 SARS-CoV-2 来时性，该商品分离物九种肉桂分离物——、连翘、大蒜、益母草、玄参、苦杏仁、蜂房、皂角、醋，在之前国习惯上用做用药胸腔哮喘 (11-13)。
分离物酮饮品胺、3，4-二邻饮品酰奎宁胺、酮 3，4-二邻饮品酰奎宁胺、原儿茶胺、酮绿原胺和丁香草以次；花蕾之前还分离物氨胺 A、B 和 10 种据信环烯醚异戊二烯氨胺[17]；该植物还分离物皂有机酸有机酸 A 和 B，以及防病变作用的氨胺 C[18,19]。连翘甲基氨胺之前分离物木脂以次、松脂醚连翘氨胺[20]。大蒜之前分离物被称为大蒜皂氨胺的甾体皂氨胺，是大蒜属植物相异的植物化学物质[21,22]。细叶益母草之前主要来时性分离物为四种单异戊二烯，(−)-薰衣草酮、(+)-里斯莱格酮、(−)-柠檬烯和 (+)-薰衣草呋喃；这种植物还分离物其他化合物，如 1-辛烯-3-醇、3-辛酮、β-月末桂烯和β-鸭跖草烯[23]。玄参分离物激过 162 种化合物，有数环烯醚异戊二烯和环烯醚异戊二烯氨胺、苯丙氨胺、有机胺、异戊二烯类、糖类、黄酮类、和皂氨胺[24]。苦杏仁之前分离物酚类、丙酮化合物和果胶多糖[25]。皂角刺之前分离物皂氨胺和羽扇豆胺[26,27]，而醋之前分离物主要来时性分离物醋胺[28]。为了促使飞行测试 RDS 的防 SARS-CoV-2 来时性，用不同挥发沸点的 RDS 预东南侧理 A549(ACE2) 细胞核，然后让这些细胞核在依赖于 RDS 的意味著给予 4-6 星期的致病。致病后，在不依赖于 RDS 的意味著培植细胞核，然后在 48 和 72 星期的时候，通过流基本型细胞核忍术对HIV致病的抑止作用顺利完成加权。为了操纵细胞核刺激性，用到钴丙啶 (PI) 对紧接著幸存者和已幸存者的细胞核顺利完成颜料，仅有在来时细胞核群之前数据分析 GFP+细胞核。如所示 2 简述，我们判读到 RDS 对 SARS-CoV-2(GFP) 有假HIV具备血糖诱发抑止作用。为了断定这些结果，我们用到内源性强调 ACE2 的 VeroE6 细胞核重复了该致病检验中。
(不知下页所示)
ACE2 内部强调，生产性 SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 HIV可对其顺利完成致病，ACE2 上会用做冠状HIV的数据数据分析 (7)。考虑到在缺乏 ACE2 激强调 [15，29，30] 的意味著，有假型HIV对 VeroE6 的致病性较低，我们还用到了发光以次酶报导基因有假型HIV，该HIV的报导基因强调由 HIV-1LTR 和 Tat 传动装置，具备更高的报导基因诱发和信噪比。
所示 2：RDS 抑止 SARS-CoV-2(GFP) 有假型HIV致病 A549(ACE2) 细胞核。
A.A549(ACE2) 细胞核用 RDS 不间断挥发 30 分钟后，用 SARS-CoV-2(GFP) 有假型HIV致病。将细胞核洗脚去HIV和 RDS，并在不依赖于 RDS 的意味著顺利完成培植。流基本型细胞核星象扫描HIV致病抑止具体情况。未致病的细胞核和致病 SARS-CoV-2(GFP) 但未经 RDS 用药的细胞核作为依此。GFP+细胞核百分比已说明了。(PI) 钴丙啶。
B.RDS 的细胞核刺激性定量。A549(ACE2) 细胞核用 RDS 不间断挥发 4 星期，洗脚去 RDS，无 RDS 培植 48 星期。钴丙啶颜料断定紧接著幸存者细胞核和已幸存者细胞核，流基本型细胞核忍术数据分析。插图血糖-反应细胞核刺激性切线，RDS 的半无故沸点 (LC50) 百分比为 1:11.9。
如所示 3A 简述，我们用到 Luc 报告基因有假HIV和 VeroE6 细胞核顺利完成致病检验中，判读到 RDS 对该HIV致病具备血糖诱发抑止作用，并且半数以上抑止沸点已确定为 1:230RDS 挥发度 (所示 3B)。我们还加权了 RDS 对 VeroE6 细胞核来时力的直接影响，已确定了 50% 细胞核幸存者血糖为 1:11.8RDS 挥发度。
所示 3：RDS 对 SARS-CoV-2(Luc) 有假HIV和野生型 SARS-CoV-2 HIV的血糖诱发抑止抑止作用。用 RDS 不间断挥发预东南侧理 A、BVeroE6 细胞核，并用 SARS-CoV-2(Luc) 有假型HIV致病。将细胞核洗脚去HIV和 RDS，并在不依赖于 RDS 的意味著顺利完成培植。在致病后 72 星期用发光以次酶扫描HIV致病的抑止作用。未致病细胞核和 SARS-CoV-2-luc 致病但未经过 RDS 用药的细胞核作为依此。检验中重复三次。插图血糖反应切线和 RDS 的 I-C50 挥发百分比为 1:230。CRDS 对 VeroE6 细胞核的细胞核刺激性也通过钴丙啶颜料和流基本型细胞核忍术定量。用 RDS 不间断挥发 4 星期，洗脚去 RDS，在不含有 RDS 的意味著培植 72 星期。插图细胞核刺激性血糖-反应切线，RDS 的半无故沸点 (LC50) 百分比为 1:13.8 挥发。DRDS 抑止传染性 SARS-CoV-2 致病。用不间断挥发的 RDS 预东南侧理 VeroE6 细胞核，并在 RDS 依赖于的意味著致病 SARS-CoV-2。致病 48 星期后，通过异种菌斑数据分析HIV释放后的HIV复制抑止具体情况。抑止检验一基本型三份顺利完成，并在 Prism7(Graph Pad) 之前用到单向方差 (One-Way ANOVA) 数据分析及 Dunnett 后检验 (Dunnett's Post Test)，以此已确定统计显着性。显著性最大值用则有暗示如下：*p
为了促使于是以确性用到有假HIV得到的结果，我们飞行测试了 RDS 对于 SARS-CoV-2 致病的堵托传染性操纵能力。如所示 3D 简述，RDS 同时也堵托了 SARS-CoV-2 对 VeroE6 细胞核的致病。RDS 在挥发 1:40 以上时可显著减少HIV斑块的形成。
综上，通过 SARS-CoV-2 有假HIV与传染性HIV的结果表明，RDS 分离物抑止 SARS-CoV-2 致病的来时性分离物，或许是通过同样灭来时HIV或堵托HIV的以前致病时程。
为促使数据数据分析或许的功能，我们将传染性 SARS-CoV-2 HIV粒状与不间断挥发的 RDS 在 37°C 下预培植 1 星期。随后，将氢氧化钠促使依次挥发-(10–1 至 10–4)，并申请加入 Vero 细胞核顺利完成异种菌斑数据分析以已确定HIV致病性的增大。如所示 4A 简述，我们判读到在 RDS 之前短暂渗透到一星期后的HIV粒状，其 SARS-CoV-2 的致病效价也椭圆形血糖诱发急剧下降。该结果断定了 RDS 可必要同样灭来时 SARS-CoV-2 HIV粒状的传染性。
我们促使飞行测试了 RDS 应该也能抑止 SARS-CoV-2 HIV种属的致病。为此，我们来进行最近整合的分离甲HIV-SARS-CoV-2 有假型HIV (Ha-CoV-2)[31] 来化学合成一复刻版 S 亚基相异，有数英国相异 (B.1.1.7)，南非相异 (B.1.351)，巴西相异 (P.1)，加州相异 (B.1.429)，和其他几个新兴相异 (B.1.2，B.1.494，B.1.1.207B.1.258，B.1.1.298)。Ha-CoV-2(Luc) 和就其 S 亚基突相异在 37°C 不间断挥发 RDS 培植 1 星期。随后，用该氢氧化钠致病 HEK293T(ACE2/TMPRESS2) 细胞内核。致病后 12 星期，发光以次酶测HIV致病的抑止作用。如所示 4B 简述，我们还判读到了 RDS 对 Ha-CoV-2(Luc) 和所有 S 亚基相异的血糖诱发抑止。
我们还飞行测试了 RDS 堵托 SARS-CoV 致病的操纵能力，用到含有 SARS-CoV 突刺亚基的 GFP 报导基因更慢HIV和[15] 伪血糖。我们将人 A549(ACE2) 细胞核用作细胞内核，将其用复刻版挥发的 RDS 预东南侧理，然后用 SARS-CoV(GFP) 报告基因有假HIV致病 4-6 星期。致病后在不含有 RDS 的意味著培植细胞核，流基本型细胞核忍术加权扫描其对HIV致病的抑止作用。比如说，用到钴丙啶除去紧接著幸存者与已幸存者的细胞核，仅有在来时细胞核群之前数据分析 GFP+细胞核。如所示 5A 简述，我们判读到 RDS 对 SARS-CoV(GFP) 有假型HIV的抑止作用椭圆形血糖诱发。我们促使断定了这些结果，并加权了 RDS 介导的抑止与 Luc 报导基因 SARS-CoV 有假型HIV，SARSCoV(Luc)。我们判读到 RDS 对 SARS-CoV(Luc) 和的抑止作用椭圆形血糖性依赖，其半抑止沸点 (IC50) 为 1:70.88 挥发度 (所示 5B，C)。考虑到 SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 都用到 ACE2 致病细胞内核，我们还飞行测试了 RDS 的防HIV来时性应该仅有针对与 ACE2 有相互作用的冠状HIV。为此，我们扫描了一种不就其的负链 RNA HIV--乙型亚型。它通过HIV血凝以次 (HA) 和细胞核α-唾液胺来致病细胞内核。为了化学合成乙型亚型，将强调乙型猪流感 A/WSN/33(H1N1) 基因组每个片段的 8 个核酸和一个 GFP-报导基因共转染到 HEK293T 细胞核之前。在 RDS 依赖于的意味著，获取HIV粒状并用做致病目标 MDCK 细胞核。如所示 6A 简述，我们判读到 RDS 对乙型亚型的抑止作用椭圆形血糖诱发。RDS 在 1:40 和 1:80 挥发时可完全堵托HIV致病，在 1:160 挥发时则可之外抑止乙型猪流感。RDS 对 MDCK 细胞核的半无故沸点 (LC50) 经测为 1:18.5(所示 6B)。这些结果表明，RDS 的防HIV来时性并非针对特定HIV，而或许能够最常抑止多种肠胃HIV，如冠状HIV和乙型亚型。
▋探讨
在本报告之前，我们断言了习惯类固醇融肺毒吗啡液 (RDS) 分离物广谱防HIV来时性，可堵托 SARS-CoV、SARSCoV-2 和乙型亚型的致病。虽然 RDS 能够抑止多种HIV，但其防HIV来时性因HIV类别和毒株而异。例如，对 SARS-CoV 更慢有假HIV的 I-C50 沸点为 1:7.9 挥发度，对 SARS-CoV-2 更慢有假HIV的 I-C50 沸点为 1:230 挥发度。对于传染性野生型 SARS-CoV-2 HIV，I-C50 为 1:40 挥发度，对乙型猪流感，其 I-C50 为 1:250。RDS 对 Ha-CoV-2 及其种属有不同的抑止作用，IC50 数最大值从 1:70 到 1:2601 挥发度不等 (所示 4B)。
(不知下一页所示)
所示 4 RDS 对 SARS-CoV-2 和衍生的 Ha-CoV-2 种属具备血糖诱发灭来时作用。ASARS-CoV-2 粒状加不间断挥发的 RDS 在 37°C 下培植 1 星期。随后，将氢氧化钠促使不间断挥发，并申请加入 Vero 细胞核之前顺利完成异种菌斑数据分析，以已确定HIV致病性增大。抑止检验一基本型三份顺利完成，并在 Prism7(GraphPad) 之前用到单向方差 (One-WayANOVA) 数据分析和 Dunnett 后检验 (Dunnett'sPostTest) 以此已确定统计显着性。显著性最大值用则有暗示如下：*p
BHa-CoV-2(Luc) 和就其 S 亚基相异与不间断挥发的 RDS 在 37°C 培植 1 星期后，用氢氧化钠致病 HEK293T(ACE2/TMPRESS2) 细胞内核。致病后 12 星期，发光以次酶测HIV致病的抑止作用。RDS 的 IC50 最大值的挥发度为 1:177(wt)，1:828(B.1.1.7)，1:124(B.1.351)，1:88(P.1)，1:134(B.1.1.207)，1:2601(B.1.1.298)，1:70(B.1.258)，1:362(B.1.429)，1:163(B.1.494)，1:137(B.1.2)。
我们促使断言了 RDS 可以抑止冠状HIV的以前致病时程。虽然明确的防HIV功能尚未清楚，但 RDS 可以通过同样灭来时HIV粒状或通过阻止HIV侵占或堵托HIV侵占后的以前时程来阻止HIV致病。在其他几种习惯之前医之前也推断出了防 SARS-CoV 和 SARS-CoV-2 的来时性。例如，一种常不知的习惯之前医——醋。
醋根之前已断言分离物醋胺以次，可抑止 SARS HIV[32] 流行病学分离株的复制。此外，另一种可用做用药肠胃哮喘的之前医——双黄连剂型，已说明了出在肾脏以血糖诱发方基本型抑止 SARS-CoV-23CL 亚基酶 (3CLpro) 来时性。粉条儿菜氨胺和粉条儿菜以次拟作为双黄连堵托 3CLpro[33] 的必要分离物。
所示 5 RDS 抑止 SARS-CoV 有假型HIV对 A549(ACE2) 细胞核的致病。用不间断挥发的 RDS 预东南侧理 A、B 细胞核，用 SARS-CoV(GFP)(A) 或 SARSCoV(Luc)B 有假型HIV致病。将细胞核清洗脚，去掉HIV和 RDS，在不依赖于 RDS 的意味著顺利完成培植。在致病后 48 星期和 72 星期，通过流基本型细胞核忍术或发光以次酶扫描来定量HIV致病的抑止作用。检验中重复三次。插图血糖响应切线，并插图 RDS 的 IC50 最大值为 1:70.9 挥发度 (C)
所示 6 RDS 抑止甲流HIV对 MDCK 细胞核的致病。(A) 用不间断挥发的 RDS 预东南侧理 MDCK 细胞核 30 分钟，然后用甲流HIV (GFP) 对其顺利完成致病。致病后，在 RDS 依赖于下培植细胞核。36 星期后用流基本型细胞核星象对HIV致病的抑止作用顺利完成定量。把未致病的细胞核与被甲流HIV (GFP) 致病但未经 RDS 东南侧理的细胞核顺利完成对比。所示之前说明了了 GFP+细胞核的百分比。PI 暗示钴丙啶 PI。
(B) 另外还用到了 MTT 测法定量了 RDS 对 MDCK 细胞核的刺激性，插图了细胞核刺激性的血糖-反应切线，经计算，RDS 的半数以上无故沸点为 1:18.5 挥发度 RDS 的必要防HIV分离物尚未已确定。然而，RDS 不同于粉条儿菜氨胺和粉条儿菜以次，RDS 可以通过同样灭来时HIV量子来堵托HIV致病 (所示 4)，而粉条儿菜氨胺和粉条儿菜以次则在HIV生命周期的后期通过堵托HIV亚基酶的来时性来发挥作用。然而，RDS 的肾脏防 SARS-CoV-2 来时性仍需在现阶段的鸟类数据数据分析和人类乳癌之前给予断定。现有，我们紧接著顺利完成小型鸟类检验中，以已确定 RDS 在肾脏堵托 SARS-CoV-2 HIV致病的潜力。
▋得出结论
我们的数据数据分析表明，RDS 可最常抑止肠胃HIV的致病，如 SARS-CoV、SARS-CoV-2 和乙型猪流感。
▋法则
细胞核和细胞核培植
HEK293T (ATCC 埃尔奇克，缅因州) MDCK (ATCC 埃尔奇克，缅因州)，VeroE6 (ATCC 埃尔奇克，缅因州) 和 A549 (ACE2) (来自 Virongy LLC 获赠，埃尔奇克，缅因州)，和 HEK293T (ACE2/TMPRESS2) (来自 Virongy LLC 获赠，埃尔奇克，缅因州) 现有保存于 Dulbecco's modifiedEagle's medium (DMEM) (赛默飞世尔科技领域 Thermo Fisher Scientific) 分离物 10% 热灭来时 FBS 和 1×青霉以次-链霉以次 (赛默飞世尔科技领域 Thermo Fisher Scientific)。在 HEK293T (ACE2/TMPRESS2) 细胞核基质之前分别以 1μg/ml 和 200μg/ml 的沸点申请加入嘌呤霉以次和潮霉以次 B。
真核细胞转染和HIV化学合成
含有 SARS-CoVS 亚基或 SARS-CoV-2S 亚基的更慢性有假型HIV粒状由 Virongy LLC (Manassas，VA) 透过，或按照上去说明了的法则[15] 化学合成。简言之，为了化学合成 GFP 报导基因更慢性有假HIV，HEK293T 细胞核与强调 SARS-CoVS 亚基或 SARS-CoV-2S 亚基的核酸、pCMVΔR8.2 和 pLKO.1-puro-TurboGFP 共转染。为了产出发光以次酶报导基因更慢性有假型HIV，将 HEK293T 细胞核与强调 SARSCoVS 亚基或 SARS-CoV-2S 亚基的核酸、pCMVΔR8.2 和 pLTR-Tat-IRES-Luc 顺利完成共转染。转染后 48 星期获取HIV上清液，离心浓缩，−80℃ 保存。野生型 SARS-CoV-2 HIV (Isolate USA-WA1/2020) 由 BEI Bioresources (Manassas，VA) 透过。pHW-NAGFP (ΔAT6) 报告基因真核细胞和 A/WSN/1933 H1N1 衍生真核细胞 pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-HA、pHW2000-NP、pHW2000-NA、pHW20000M 由 FengLi 博士友好透过。在亚型 A-GFP 报导基因量子化学合成之前，将 pHW2000-pb2、pHW2000-pb1、pHW2000-PA、pHW2000-ha、pHW2000-np、pHW2000-na、pHW2000-m、pHW2000-ns 和 pHW-NA-GFP 共转染 HEK293T 细胞核 (ΔAT6)。48 星期后获取HIV上清液。SARS-CoV-2S、M、E、N 强调核酸澳大利亚进口 Sinobiological。来进行 Twist Bioscience 合成了 Ha-CoV-2(Luc) 核酸和 S 亚基突变核酸。Ha-CoV-2(Luc) 和 S 亚基突变量子按照上去说明了法则[31] 顺利完成化学合成。
HIV致病和类固醇抑止检验
RDS(融肺毒吗啡液)(来自 Dejia Harmony 获赠，利斯堡，缅因州) 是由两匹博士检验中室 (Burnaby，BC，Canada) 生产的一种商业性商品。RDS 之前所有肉桂分离物大多符合《之前国药典 2015 年版》「饮片」标准，有数必要分离物含有量及硬核、农药限量扫描。RDS 是一种之前医的共煎剂，终于硝酸盐在电介质状况下水蒸气。SARS-CoV-2 防血清由 LanceA. Liotta 医生透过。将贝拉朵尔盐胺盐 (Sigma) 重新水滴在二酮亚砜 (Sigma) 之前。对于有假型HIV致病，12 孔板之前的 A549(ACE2) 细胞核 (来自 Virongy LLC 获赠，埃尔奇克，缅因州) 或 VeroE6 细胞核用 RDS 预东南侧理 30 分钟，在 37℃ 下致病 4-6 星期，然后在新鲜基质之前洗脚涤培植 48-72 星期。对于 VeroE6 细胞核的致病，细胞核也被 CoV-2 有假型HIV致病进一步提高剂 (CoV-2PIE) (来自 Virongy LLC 获赠，埃尔奇克，缅因州) 预东南侧理后，在 37°C 下如此一来东南侧理 30 分钟。用到 GloMaxDiscover 酶标星象 (Promega) 数据分析细胞核裂解物的发光以次酶来时性。对于野生型 SARS-CoV-2 致病，VeroE6 细胞核在 37°C 下用 RDS 预东南侧理 30 分钟，然后用 MOI 为 0.05 致病 SARS-CoV-2 (Isolate USA-WA1/2020；BEI Bioresources) 在伊莉莎白沃恩国立大学的 BSL-3 转送设施内停留 1 星期。细胞核用 PBS 洗脚涤 2 次，用含有 RDS 的基质培植 48 星期。从上清之前提炼出HIV，用 12 孔板培植的 Vero 细胞核单层之前的异种菌斑检验测小瓶滴度。简言之，每个容器在非常简单的 Dul-becco's ModifiedEagle 基质 (VWR) 之前化学合成，还包括有 1X 青霉以次-链霉以次 (VWR)，并添加 10% 的 FBS(赛默飞世尔科技领域 Thermo Fisher Scientific)。然后将 200 微升的每种挥发液吸附到 VeroE6 细胞核单层的三个平行孔上 1 星期。然后用 1～2 ml0.6% 琼脂糖 (Invitrogen) 和一之外非常简单的 Eagle Minimal Essential 基质 (VWR) 的氢氧化钠散布单层，含有 1X 青霉以次-链霉以次，并添加 10%FBS。48 星期后，将单层膜固定在 10% 甲醛溶液之前 1 星期，并去除散布的琼脂托。为了颜料斑块，申请加入分离物 20% 乙醇的 1% 升华紫染料溶液 5 分钟，然后用去离子水洗脚涤。对于乙型亚型致病 MDCK 细胞核，在 37°C 下用 RDS 预东南侧理 30 分钟，然后用 A-GFP 报导基因HIV致病 6 星期。用含有 RDS 的基质洗脚涤细胞核，培植 36 星期。GFP 强调通过流基本型细胞核星象定量。(FACSCalibur，BD Biosciences).
对于 SARS-CoV-2 HIV粒状的 RDS 灭来时检验，将 100μl 不间断挥发的 RDS 添加到 1 mlSARS-CoV-2 HIV原液 (3.65×105PFU/ml) 之前，终于 RDS 挥发为 1:20，1:40 或 1:80。也有数依此状况 (1 ml HIV+100μl 基质)。氢氧化钠在 37°C 下培植 1 星期。随后，对氢氧化钠顺利完成复刻版挥发以转化成额外的 1:10、1:100、1:1,000 和 1:10,000 挥发度，并将不间断挥发的容器申请加入 12 孔板之前的 Vero 细胞核之前，用做顺利完成异种菌斑测数据分析。斑块测之前终于的 RDS 挥发度为 1:200 至 1:200,000；1:400 到 1:400,000；和 1:800 到 1:800,000 的 RDS 挥发液。
Ha-CoV-2(Luc) 和 S 亚基突变量子按照上去说明了的法则[31] 化学合成。对于 Ha-CoV-2(Luc) 的 RDS 灭来时，将 5μl 不间断挥发的 RDS 添加到 45μlHa-CoV-2(Luc) 或相异之前，终于 RDS 挥发度为 1:20、1:40、1:80、1:160 或 1:320。将氢氧化钠在 37°C 下培植 1 星期，然后在 RDS 依赖于下致病 HEK293T (ACE2/TMPRESS2) 细胞核 12 星期。用到 GloMax Discover 酶标星象 (Promega) 数据分析细胞核裂解物的发光以次酶来时性。
细胞核刺激性数据分析扫描
用钴丙啶颜料和流基本型细胞核忍术加权对 A549 (ACE2) 细胞核和 VeroE6 细胞核的类固醇细胞核刺激性顺利完成扫描，如所述 (34)。用到细胞核增殖路易斯酸盒 I(MTT) (Sigma) 和制造商劝告的方案对 MDCK 细胞核的类固醇刺激性顺利完成加权。简言之，将 MDCK 细胞核 (ATCC) 以每孔 1×-105 个细胞核的低速接种到 12 孔板之前。细胞核培植隔夜后，通过 RDS 东南侧理 1 天，然后在 MTT 标记路易斯酸 (Sigma) 的基质之前培植。将细胞核与标记路易斯酸共同培植 4 星期，如此一来后续申请加入 MTT 增溶液。培植皿哺育过夜，用 GloMax Discover 酶标星象 (Promega) 测吸光度。
直译
SARS-CoV：轻微急性性疾病综合症就其冠状HIV；SARSCoV-2：Severe 轻微急性性疾病综合症就其冠状HIV-2；TCM：习惯之前医；RDS：肠胃施用吗啡液；Ha-CoV-2：分离乙型新冠HIV有假HIV。
致谢
非常感谢 FengLi 透过亚型强调核酸，非常感谢 LanceLiotta 透过防毒血清；非常感谢 TedCi，HeSun，ZhigangGao，WanyingWu 的探讨与劝告；非常感谢 KevinCarter、MarkMamdar、RichKeurajian、KarenFreidouni 透过 RDS 和肉桂精油。
著者贡献
此次检验中由 Y.W.，R.H. 和 L.A.H. 设计，由 Y.W. 撰稿，由 L.A.H. 校对。B.H.，D.Y.，A.A.O.，L.D.C.，S.H.，D.D、GA 及 YM 执行了该检验中。所有著者已阅读并批准终于草稿。
资金
本数据数据分析的经费来自于伊莉莎白沃恩国立大学内部款项 223741(DeJiaHarmony/Anti-SARS-CoV-2)，该款项由德佳和畅 (DeJiaHarmony) 透过。
数据和材料的可用性
本数据数据分析之前转化成或数据分析的所有数据大多还包括有在本文之前。路易斯酸可从 Y.W 东南侧获取。
回应
批准及参与同意
不适用
同意出版
不适用
竞争公共利益
伊莉莎白沃恩国立大学各东部生物防御和传染病之前心的 RMH 和 YW 已得到了德佳和畅 (DejiaHarmony) 的数据数据分析资助，LAH 为德佳和畅担任顾问并得到了酬劳。无法其他彼此间或社区来时动或许会直接影响到提交的指导。
著者详细信息
1澳大利亚缅因州伊莉莎白沃恩国立大学系统生物学学院各东部生物防御和传染病之前心，埃尔奇克 20110。
2VirongyLLC，缅因州埃尔奇克。3加拿大伯纳比，BCV5J0E5 两匹博士检验中室 (Dr.Ma's LaboratoriesInc.)。4 澳大利亚缅因州利斯堡筹备会议科学组织，20176。
收稿日期：2021 年 4 月末 7 日
给予日期：2021 年 5 月末 10 日
线上出版时间：2021 年 5 月末 29 日
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校对： 翟激男相关新闻
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